Revue Malgache de Biologie Clinique 2025 :(1)1 : 033-036

PROTOCOLE

Valeurs de référence des IgE totales sériques par technique ELISA chez les Malgaches : mise au point au laboratoire d’immunologie CHU-JRA

Total IgE reference values by ELISA in Malagasy population: technical setup

at Immunology laboratory CHU-JRA

EE Batavisoaniatsy², AA Raherinaivo¹, SS Rafaramalala¹, H Ramandimby¹, RT Randriamahazo¹

1. Laboratoire d’Immunologie du Centre Hospitalier Universitaire Joseph Ravoahangy Andrianavalona, Antananarivo
2. Laboratoire de Biologie Médicale de la Direction Centrale du Service de Santé Militaire Ampahibe , Antananarivo

Auteur correspondant :

Batavisoaniatsy Elodie Emile

E-mail : elodie.kwely@gmail.com

Téléphone :  +261 34 66 411 55

Rmbc 2024006 (1.84 Mo)

Résumé

Introduction : La détermination des valeurs de référence d’une variable biologique est  essentielle au laboratoire. La présente étude vise à établir les valeurs de référence des IgE totales sériques à l’UPFR Immunologie du CHU JRA.

Matériels et méthodes : Une étude de mise au point technique sur 3 mois a fait appel à 88 individus apparemment sains vus à l’UPFR. Le dosage a été fait sur sérum par technique immunoenzymatique ELISA utilisant le kit NOVATEC® Immunodiagnostica GmBH. L’âge, le genre ainsi que le taux d’IgE sériques totales ont été analysés sur MS XLSTAT^© 2013.

Résultats : Un total de 88 individus a été évalué avec  un sex-ratio de 1,04 et une prédominance des sujets de plus de 16 ans (n= 55/88). Le taux moyen (±écart-type) en UI/ml des IgE totales sériques a été respectivement de 61,93 (± 50,47) pour les 0 à 3 ans ; 105,93 (± 63,04) pour les 3 à 16 ans et 177,11 (± 67,37). Aucune différence statistiquement significative n’a été retrouvée selon le genre et les valeurs du fabricant (p=0,39).

Conclusion : Le taux des Ig E sériques totales augmente avec l’âge sans différence selon le genre.

Mots-clés : IgE totales - Immunoenzymatique - Madagascar - valeurs de référence

Abstract

Introduction : Establishing  biological parameter reference values  is essential in clinical biology. The study aims to establish reference values for  toal serum IgE at UPFR Immunologie, CHU JRA.

Materials and methods: A technical setup was conducted during 3 months  including  88 seeminglyealthy individuals seen at the UPFR. Assays were performed on sera with an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using the NOVATEC® Immunodiagnostica GmBH kit. Age, gender and total serum IgE levels (UI/ml) were analyzed on MS XLSTAT© 2013.

Results: We evaluated a total of 88 individuals, with a sex-ratio of 1.04 and a predominance of subjects over 16 years of age (n= 55/88). Average rate of total IgE mean (± standard deviation)  in IU/ml were respectively 61.93 (± 50.47) for 0-3 year olds; 105.93 (± 63.04) for 3-16 year olds and 177.11 (± 67.37) . No statistically significant differences were found according to gender or manufacturer's values (p=0.39).

Conclusion: Serum total IgE levels increase with age, with no gender differences.

Key words:  Immunoenzymatic - Madagascar - reference values - Total IgE

Introduction

Les laboratoires de Biologie Médicale sont tenus à fournir des valeurs de référence actualisées aux cliniciens.  Les intervalles de référence se définissent comme des intervalles spécifiées de la distribution des valeurs obtenues  à partir d’une population de sujets sains (1). Ces valeurs de référence sont sujettes à des variations selon les pays  selon la population.

Pour les immunoglobulines E (IgE) totales sériques,  son dosage est communément connu  dans l’évaluation des pathologies atopiques bien que le dosage isolé des IgE totales sériques a un rôle limité dans le diagnostic des allergies (2). Les valeurs élevées d’IgE totales peuvent se voir dans nombreuses conditions non atopiques comme les immunodéficiences innées, les néoplasies, les parasitoses et les inflammations chroniques. Par contre, la signification des valeurs plus basses des IgE totales reste incertaine et nécessite des explorations cliniques et biologiques plus approfondies.

Peu de documentations sont rapportées sur les valeurs des IgE totales dans la population Malagasy.  Ainsi, chaque laboratoire adopte leurs valeurs de référence selon les valeurs des fabricants. L’objectif a été d’établir les valeurs de référence actualisées des IgE totales sériques dans la population apparemment saine d’Antananarivo.

Méthodologie :

Une étude prospective descriptive a été effectuée au niveau de l’Unité Paraclinique de Formation et de Recherche (UPFR) en  Immunologie du Centre Hospitalier Universitaire (CHU) Joseph Ravoahangy Andrianavalona Antananarivo sur une période de 3 mois allant du 1^er Novembre 2023 au 31 Janvier 2024.

1. Choix de la population d’étude

Un échantillonnage aléatoire simple sur le logiciel OpenEpi ont été nécessaire pour former un sous-ensemble homogène. Après consentement éclairé des individus et des parents et tuteurs pour les sujets mineurs, nous avons inclus les individus tout âge confondu, venus à l’UPFR Immunologie pour une analyse, les accompagnateurs des malades ainsi que les membres du personnel hospitalier, ne rapportant pas de maladies allergiques dans ses antécédents ou des pathologies pouvant influencer la valeur des IgE totales sériques comme mentionnées ci-dessus. Une numération formule sanguine a été effectué pour chaque sujet inclus, la présence d’une éosinophilie et/ou basophilie ont été des critères d’exclusion. Notre étude est limitée par l’absence d’examen parasitologique des selles chez les sujets inclus.

 Des prélèvements de 4 ml de sang collectés sur tube sec (tube rouge) ont été par la suite effectués. Suivant le test de Fisher Snecdecor au seuil de 5% évaluant l'homogénéité de la populationLes individus inclus ont été  répartis selon trois classes d’âge : 0- 3 ans ; 3-16 ans et plus de 16 ans. L’âge, le genre ainsi que le taux des IgE totales sériques ont été évalués.

2. Manipulations techniques

Les échantillons ont été centrifugés rapidement à 5000 tours par minute pendant 5 minutes à +9°C dans une centrifugeuse réfrigérée dans les 30 minutes après le prélèvement. Les sérums recueillis ont été aliquoté et conservé à -20°C jusqu'au dosage. Le dosage des IgE totales sériques a été fait par technique enzymatique : Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA) en suivant la procédure de la fiche technique du coffret NOVATEC® Immunodiagnostica GmBH. La lecture de la densité optique a été faite sur un spectrophotomètre de 340-700nm de longueur d’ondes.

3. Analyse statistique

L'analyse statistique a été effectuée avec le logiciel MS XLSTAT et MS EXCEL 2010. Les valeurs ont été affectées de leurs moyennes, les écart-types et les intervalles de référence (IR) avec un risque α de 5%.

Pour déterminer les IR, la méthode paramétrique de GAUSS au risque α=5%  (IR = m ± 1,96 s) a été utilisée avec IR = m ± 1,96. Les différentes moyennes ont été comparées à l'aide du t-test de Student au risque α=5%.  Le test de Khi2 a été utilisé pour comparer les valeurs moyennes de la population en fonction des tranches d'âge.

Résultats

Un total de 88 individus a été inclus dont 45 hommes et 43 femmes soit un sex-ratio de 1,04. Les individus âgés de plus de 16 ans ont représenté 62,50% de la population (n=55) (Tableau I).

Tableau I : Caractéristiques de la population d’étude

La valeur des IgE totales sériques a varié de 3,65UI /ml à 313,02 UI/ml. La valeur moyenne a été de 136,34 ± 80,92 UI/ml. L’écart-type a été plus élevé chez les individus de plus de 16ans (Tableau II).

Tableau II : Valeurs d’IgE totales selon tranche d’âge

IC : Intervalle de confiance : renvoi l’intervalle de confiance pour la moyenne d’une population, à l’aide de la probabilité d’une variable aléatoire suivant le t-test de Student.

Par l’étude de l’homogénéité de la population, aucune différence significative n’ a été trouvée entre les valeurs des IgE totales sériques et le genre. (Tableau III).

Tableau III :  Moyennes des IgE totales selon le genre et la tranche d’âge

Les résultats ont montré l'homogénéité de la population d'étude avec p >0.05

Les intervalles de référence pour chaque tranche d’âge ont été calculés par la méthode non paramétrique des quantiles consistant à aligner les valeurs obtenues par ordre croissant et éliminer 2,5 % des valeurs basses et 2,5% des valeurs hautes, soit 5% des valeurs. Les valeurs restantes ont constitué l’intervalle de référence contenant 95% des valeurs et encadrées par la plus petite et la plus grande valeur de référence résiduelle (Figure 1).

Figure 1 : Les valeurs dans les intervalles de référence selon l’âge

 Selon la fiche technique des fabricants ; les valeurs de référence  obtenues ont été comparées à celles du kit NOVATEC® Immunodiagnostica GmBH ( Tableau IV)

Tableau IV : Comparaison des valeurs de référence d’IgE totales avec le kit NOVATEC® Immunodiagnostica GmBH selon la tranche d’âge

Le taux d’IgE totales sériques augmente avec l’âge. Aucune différence significative n’a été retrouvée (p=0,389).

Discussion

Les médecins biologistes ont pour vocation d’aider à l’interprétation des examens biologiques dans la phase post-analytique. Il est ainsi important d’avoir des intervalles de référence dûment validées pour chaque résultat (1). Ce concept valeur de référence est maintenant adopté par l’ensemble des professionnels de santé, des biologistes, des médecins et descliniciens. Elles permettent de standardiser, harmoniser et rendre plus rigoureuse la présentation des résultats. 

Chaque laboratoire est appelé à définir ses propres valeurs de référence biologique correspondant à l’intervalle calculé selon la distribution des valeurs obtenue chez95% d’une population saine et en bonne santé, centrée sur une médiane. Cet intervalle peut varier en fonction du type d’échantillon primaire et de la méthode utilisée. Une bonne maîtrise des outils statistiques nécessaires à la validation de méthode s’inscrit pleinement dans la démarche qualité du laboratoire.

Dans la présente étude effectuée à l’UPFR Immunologie du CHU JRA, la population d’étude était constituée de 88 personnes dont 51,14% hommes.  Trois classes d’âges ont été étudiées : 22 sujets de moins de 3ans (25,00%), 11 sujets âgés de 3 à 16 ans (12,50%) 55 sujets plus de 16 ans soit 62,50%.  En Iran en 2010, un dosage des IgE totales portant sur la une 366 donneurs de sang a aussi retrouvé une prédominance masculine (59,83%). Par contre, la tranche d’âge de 31-40 ans a été majoritaire   (3). En Norvège en 2023, l’étude portant sur des adultes a rapporté une légère  prédominance féminine (50,62%) (4).

Par rapport aux valeurs des IgE totales sériques, il existe à travers le monde, une grande variabilité géographique de leur taux sanguin. Au Québec, la moyenne chez les enfants de moins de 3 ans est de 44,41 UI/ml. Pour la même tranche d’âge à Madagascar, un taux moyen plus élevé est constaté avec 61,93 UI/ml et un intervalle de référence entre 17,01UI/ml a 105,39 UI/ml.

Pour les plus âgés, nous avons retrouvé que l’intervalle de référence chez des adultes âgés de plus de 16ans a été de 9,85- 222,29 UI/ml. Selon Shoukouhi  Shoormasti R et al en 2010, cet écart est aussi retrouvé dans la population adulte iranienne avec 2-373 UI /ml pour les 18 -60 ans (3). L’absence de différence significative entre le taux des IgE totales chez les hommes et les femmes est souvent rapporté dans la littérature (6–8) .   

Bien que notre étude ait été monocentrique, elle a permis de mettre à disposition du laboratoire des valeurs de référence spécifiques à la population Malagasy en ne se basant plus sur les valeurs proposées par le fabricant. Il est du devoir des laboratoires de biologie médicale de tenir compte si les valeurs de référence utilisées sont issues de la littérature  ou de la notice du fabricant ou des données propres à la population (9).

Conclusion :

Le taux moyen des IgE totales sériques dans la population d’étude a été de 136,34 ± 80,92 UI/ml. Selon trois tranches d’âge différentes, les intervalles de référence ont été de 17,01 à 105,39UI/ml pour les moins de 3 ans ; 41,54 à 160,21UI/ml pour les individus âgés de 3 à 16 ans et de 140,66 à 222,26UI/ml pour les plus de 16 ans.  Les valeurs de référence au niveau de la population générale fait appel à une étude à grande échelle.

Conflits d’intérêts :

Aucun

Références

(1)    Henny J. Determining and verifying reference intervals in clinical laboratories. Ann Biol Clin. 2011; 69: 229–37.

(2)    Ansotegui IJ, Melioli G, Canonica G, Caraballo L et al. IgE allergy diagnostics and other relevant tests in allergy, a World Allergy Organization position paper. World Allergy Organ J 2020; 13: 100080.

(3)    Shoormasti RS, Pourpak Z, Eshraghian M, Ashtiani MTH et al. The Study of Total IgE Reference Range in Healthy Adults in Tehran, Iran. Iran J Public Health 2010; 39: 32–36.

(4)    Vinnes EW, Skarbø B, Wentzel-Larsen T, Sylte MS et al. Updated total IgE reference intervals in Norwegian adults. Immun Inflamm Dis 2023 ; 11 : e751.

(5)    Levesque B, Duchesne JF, Gingras S, Allard P et al. Total and specific Immunoglobulin E and their relationship to respiratory symptoms in Québec children and adolescents. Can Respir J. 2005; 12 (8): 426-32

(6)    Tu YL, Chang S-W, Tsai H-J, Chen LC et al. Total serum IgE in a population-based study of Asian children in Taiwan: reference value and significance in the diagnosis of allergy. PloS One 2013; 8: e80996.

(7)    Doekes G, Douwes J, Wouters I, De Wind S et al. Enzyme immunoassays for total and allergen specific IgE in population studies. Occup Environ Med 1996; 53: 63–70.

(8)    Vinnes EW, Karlsen Sletten IS, Alnæs M, Storaas T et al. A survey of total IgE reference intervals reported by Scandinavian and British medical laboratories - a need for harmonisation. Scand J Clin Lab Invest 2023; 83: 470–478.

(9)    Giroud C, Dumontet M, Vassault A, Braconnier F et al. Recommandations relatives à l’expression de l’incertitude de mesure des résultats quantitatifs en biologie médicale (Document F). Ann Biol Clin. 2007;65 (2):185-200.